【摘要】：目的在细胞和整体动物水平,利用RNA干扰技术下调绒猴p53基因表达。方法对狨猴p53基因做生物信息学分析,针对靶序列设计shRNA干扰序列,构建在腺相关病毒载体上,转染非洲绿猴肾细胞(cos-7),在细胞水平用荧光定量PCR检测p53mRNA抑制效果,以Western blot方法检测p53蛋白水平表达变化;优选shRNA干扰序列,包装含shRNA干扰序列的8型腺相关病毒,静脉注射感染狨猴;手术取少量肝脏组织,用Western blot和免疫组化方法检测p53蛋白水平的变化。结果细胞水平研究发现2个有效RNA干扰靶点,mRNA干扰效率分别为(82.7±8.1)%和(80.7±7.5)%(P0.05);蛋白表达下调(77.3±11.5)%和(73.7±10.7)%(P0.05);2只绒猴感染病毒后,经活体荧光成像分析可见病毒在肝脏、睾丸、颈部等位置分布,狨猴肝脏P53蛋白经Western blot、免疫组化分析未见明显变化。结论本研究在细胞水平实现绒猴P53基因表达下调,但整体动物水平狨猴肝脏P53蛋白表达未发现明显变化;今后需在感染方式等方面做进一步优化。

【关键词】： AAV P RNA干扰 狨猴 

【分类号】：R373

【正文快照】： 

RNAi技术可以特异性剔除或关闭特定基因的表达,广泛应用于基因功能研究与基因治疗领域。利用RNAi的方法已经成功在啮齿类动物的受精卵中下调基因的表达,建立相关的动物模型[1],但是在狨猴上还没有相应研究。腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)是一种重要的基因载体,主

【相似文献】

1 梁梧生,李华,黄小琴,练幼辉,曹逸云;引进的棉顶狨猴群简介[J];动物学杂志;1991年02期 

2 梁梧生,代解杰,练幼辉,黄晓琴,陆劲松,童品芬;棕肩狨猴人工饲养与繁殖的初步研究[J];中国实验动物学报;1993年01期 

3 ;开眼界[J];乡镇论坛;2009年19期 

4 ;日本科学家培育出转基因普通狨猴[J];生物学通报;2009年07期 

5 潘振业;;狨猴在生物医学研究中的应用[J];上海实验动物科学;1985年03期 

6 James Ogden;余家璜;富群华;;野捕髭狨猴在实验室条件下的繁殖[J];上海实验动物科学;1987年01期 

7 潘振业,马东林,陈天培;野生白须狨猴的体内寄生虫[J];动物学杂志;1988年04期 

8 峰晓尉;;狨猴笼养情况的初步观察[J];上海实验动物科学;1989年03期 

9 练幼辉;在狨猴中对甲型肝炎活疫苗作进一步评价[J];国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册;1992年06期 

10 吴绍源;;狨猴致死性麻疹的发病机理和预防[J];国外医学.生物制品分册;1982年01期